2×qPCR SmArt Mix(SYBR Green)
(No Rox/Low Rox/High Rox)
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| DY20301 | 2×qPCR SmArt Mix（SYBR Green)（No Rox） | 5×1 mL | 475 |
DY20302 | 2×qPCR SmArt Mix（SYBR Green)（Low Rox） | 5×1 mL | 475 |
DY20303 | 2×qPCR SmArt Mix（SYBR Green)（High Rox） | 5×1 mL | 475 |
产品描述
本品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的2×预混液。已经将DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液、BSA和SYBR Green I等试剂预混, 使用时只需加入模板、引物和水，可减少操作步骤，缩短加样时间，降低污染几率, 具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。其核心组分是抗体修饰的热启动TaqDNA聚合酶，配合精心优化Buffer体系，有效抑制非特异性扩增，可对宽广浓度范围的模板进行准确定量，获得稳定可靠的qPCR结果，可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对目的基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。
保存方式
-20 ℃避光储存，有效期18个月。
避免反复冻融。可在4℃避光条件下稳定存放6个月。
注意事项
1. 请根据qPCR仪器技术指导决定购买的产品是否含ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2. 本制品含SYBR Green I，在强光下易分解，导致灵敏度降低，使用时请避免长时间强光照射。
3. 为提高扩增特异性，减少背景，建议在冰上配制PCR反应液，再放入仪器中扩增。
4. 使用前上下颠倒轻轻混匀Mix，请勿涡旋振荡混匀，避免产生过多气泡。
5. 推荐的引物终浓度为0.2 μM，可在0.1~1 μM范围内优化。
建议反应体系（推荐冰上配制）
组分 | 体积（μL） | 体积（μL） | 终浓度 |
2×qPCR SmArt Mix(SYBR Green)* | 25 | 10 | 1× |
模板DNA | 2 | 0.8 | 5~100 ng/10μL |
Forward Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
无菌超纯水 | to 50 | to 20 | - |
*No Rox，Low Rox，High Rox使用方法相同。
qPCR反应程序（可根据机型适当调整）
| 两步法 | ||||
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
| 预变性 | 95℃ | 30 sec | 1 | |
| 变性 | 95℃ | 10 sec | } | 40 Cycles |
| 退火a/延伸a | 60℃ | 30 sec | ||
| 熔解曲线b | 仪器默认设置 | 1 | ||
| 三步法 | ||||
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
| 预变性 | 95℃ | 30 sec | 1 | |
| 变性 | 95℃ | 10 sec | } | 40 Cycles |
| 退火a | 55~65℃ | 10 sec | ||
| 延伸a | 72℃ | 30 sec | ||
| 熔解曲线b | 仪器默认设置 | 1 | ||
a. 根据引物的Tm值进行退火（退火/延伸）温度的设定。若扩增片段在200bp以内，延伸（退火/延伸）时间可以设置为15sec。此外，延伸时间的设置还需根据qPCR仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整。
b. 不同仪器的熔解曲线采集程序有所差别，一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时，则需要进行反应条件的优化，可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行：
1. 引物浓度调整：当引物终浓度在0.1~1.0 μM范围之间变化时，引物浓度越低, 扩增特异性越高，但扩增效率会有所下降。
2. 扩增程序优化：需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度。需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。
引物设计指南
1. 扩增产物长度建议控制在80~200 bp，引物长度为18~25 bp。
2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不超过1℃为佳，Tm值控制在58~62℃为佳。
3. 引物的GC含量控制在40 %~60 %之间。引物3'端最后一个碱基最好为G或者C。
4. 引物 A、G、C、T整体分布尽量要均匀，避开T/C或者A/G的连续结构（特别是3'端）。
5. 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列。
6. 使用NCBI BLAST功能检索确认引物的特异性。
适用机型
产品名称 | 产品编号 | 适用机型 |
2×qPCR SmArt Mix（SYBR Green)（No Rox） | DY20301 | Bio-Rad CFX全系列 Roche LightCycler™系列 Eppendorf Mastercycler® ep realplex系列 Qiagen Corbett Rotor-Gene®系列 Takara Thermal Cycler Dice Analytikjena qTOWER系列等 |
2×qPCR SmArt Mix（SYBR Green）(Low Rox） | DY20302 | ABI 7500，7500 Fast，ViiA™7，QuantStudio™系列， Stratagene MX3000P™，MX3005P™，MX4000™等 |
2×qPCR SmArt Mix（SYBR Green）（High Rox） | DY20303 | ABI 7000，7300，7700，7900HT，7900HT Fast， StepOne™，StepOne Plus™等 |
2×qPCR SmArt Mix（SYBR Green).pdf