分散酶II（来源于多粘芽孢杆菌）
Dispase II （from Bacillus polymyxa）
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| DY50211 | 分散酶II（来源于多粘芽孢杆菌） | 100mg | 400 |
| DY50211 | 分散酶II（来源于多粘芽孢杆菌） | 1g | 3600 |
产品描述
中性蛋白酶（Neutral protease），商业名称Dispase II，也称分散酶II，普遍用于不同组织和器官中的细胞分离。Dispase II是一种非特异性金属蛋白酶，能快速有效且温和的破坏组织细胞外基质释放单细胞培养物（原代细胞培养物）或收集已培养的细胞将其转移到新的培养基质上（传代培养）。另外，还能预防悬浮细胞培养过程中发生的成团现象。Dispase II极其稳定，不会受温度、pH和血清内容物的干扰；通过螯合剂或稀释很容易失活；酶活温和，对细胞损伤小，可良好维持细胞膜完整性。
本品来源于多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa），无支原体或其他动物病毒污染。以非无菌的冻干粉形式提供，比活力≥0.8 U/mg蛋白，使用前需进行除菌。常用工作浓度范围为0.6-2.4 U/mL。反应最佳pH: 6.0-8.5。激活剂：最佳Ca2+浓度为2 mM，该酶已含足量Ca2+ 确保最佳酶活力。抑制剂： EDTA, EGTA, Hg2+ 以及其他重金属。该酶活性不受血清干扰。
保存方式
2-8℃干燥保存，可保存24个月。
操作说明
一、储存液和工作液制备
1）储存液制备：用Hepes缓冲盐溶液（50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl）溶解Dispase II冻干粉，配制成10 mg/mL的储存液，用0.22 µM滤膜过滤除菌。本储存液置于2-8℃，2周稳定；根据单次用量分装冻存，高达2个月稳定，避免反复冻融。
2）工作液制备：使用时用合适的细胞培养液将储存液稀释到工作液浓度即可，常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。不推荐使用> 2.4 U/mL的工作浓度。具体使用浓度请根据自身实验体系或参考文献来调整。
二、组织的解离
1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成小块；
2）用无菌PBS清洗组织块；
3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4 U/mL），确保全部浸没。
4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。
注意：若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1 h即可达到分离目的，也可以孵育更长时间。
5）如有需要，可用无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块，或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，如有必要，换用新鲜酶溶液以进一步解离残留组织。
6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；
7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。
三、 细胞传代
1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5 min；
2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10 min；
3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15 min；
4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；
5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。