超高灵敏型ECL发光液
Ultra high-sensitive ECL Reagent
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| DY30218 | 超高灵敏型ECL发光液 | 100 mL (50 mL+50 mL) | 350 |
产品描述
Ultra-high sensitive ECL Reagent是一种基于Luminol的高灵敏性、非放射性化学发光底物，用于检测免疫印迹中固定在膜上的标记有辣根过氧化物酶 (HRP) 的蛋白，可检测fg级的抗原。Luminol在酶的催化作用下发生氧化降解，在增强剂的作用下发射波长为428 nm的极强的光信号，持续时间长、稳定性高、检测方便。其原理是，蛋白质或核酸电泳分离后转印到膜上，以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白，或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制 的ECL 工作液，在室温下孵育膜1分钟，将印记膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒中，然后暗室中将X光胶片压在膜上曝光数秒至数分钟。显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。也可不进行X光胶片曝光，而直接对印记膜进行化学发光检测。 光信号支持重复曝光，也可洗膜脱抗体后供再次检测。
此产品灵敏度比其它普通化学发光产品更高，抗体须比其他底物检测时使用浓度更低。
保存方式
2-8℃避光保存，可稳定保存1年。
操作步骤
1. 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，将转印好的膜从转膜装置上卸下来，并用5 % 脱脂牛奶封闭膜上的非特异结合位点，室温下摇晃封闭1小时。
2. 弃封闭液，加入一抗工作液，2-8℃静置孵育过夜。
3. 用TBST漂洗膜2次，然后用充分体积的TBST洗膜3-6次，每次5分钟。
4. 用标记HRP的二抗工作液室温下孵育1小时。
5. 重复步骤3，彻底洗掉没有结合的二抗。
6. 将试剂A和试剂B按1:1的比例混合成ECL工作液，根据每平方厘米膜使用0.1-0.2 mL的量配制工作液，用ECL工作液充分覆盖膜后室温孵育1分钟。
注：ECL工作液需现配现用，室温下放置不能超过1小时。
7. 显影拍照。
注意事项
1. 本试剂每个批号均独立优化，请不要混用或稀释本试剂以免降低敏感性。
2. ECL工作液配制过程中吸取试剂A和试剂B时务必更换枪头，工作液新鲜配制后立即使用，放置过久会影响灵敏度。
3. 根据不同实验选择合适的封闭剂，如避免使用脱脂奶粉检测抗生素/生物素系统，因为牛奶中含有许多内源生物素，会导致背景过高。
4. 使用足够体积的洗涤缓冲液、封闭液、抗体稀释液及ECL底物反应液，使液体能充分覆盖膜表面，避免膜变干。使用大量洗涤缓冲液和封闭液并不会导致没有信号。在各孵育和洗涤的过程中，建议使用水平托盘摇床。
5. 避免使用含有叠氮钠的缓冲液，叠氮钠会抑制HRP反应，干扰实验结果。
6. 请勿空手拿膜，务必全程戴手套并使用清洁的平口镊子夹膜。
7. 操作过程中请勿使用生锈的金属盒 (如剪刀、镊子等)，以免造成严重的背景。
8. 根据蛋白丰度不同曝光时间不同，约数秒至数小时。
9. 曝光时间过长会使背景加深，曝光不足会导致条带模糊。
10. 如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。