SmArt RT Master Premix（4×）(+gDNA remover)
SmArt反转录预混液（4×）（含gDNA 清除剂）
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| DY90104 | SmArt RT Master Premix（4×）(+gDNA remover) | 100 T | 786 |
产品描述
RT Mix for qPCR(+gDNA remover)包含针对逆转录优化的最适Buffer以及逆转录酶，提升了cDNA合成的效率，适用于两步法qRT-PCR检测。试剂盒中的5 × gDNA remover可去除RNA模板中残留的基因组DNA ，保证后续定量结果更加可靠，并可简化qPCR引物设计，无需跨内含子设计引物；4 × RT Mix中含有逆转录反应所需的所有组分，加入模板RNA和水即可迅速进行反应，同时终止gDNA remover作用，保证cDNA的完整性。逆转录产物兼容染料法与探针法qPCR，可进行高性能的基因表达分析。
产品组分
| 组分 | 100 T |
| 5 × gDNA remover | 300 µL |
| 4 × RT Mix | 500 µL |
保存方式
-30℃ ~ -15℃保存，有效期1年， ≤0℃运输。
适用范围
本产品广泛适用于动物、植物以及微生物RNA的逆转录反应，逆转录产物兼容染料法和探针法qPCR。
操作方法
1. 基因组DNA去除
| RNase-free H2O | 10 µL |
| 5 × gDNA remover | 3 µL |
| 模板RNA(1 pg - 1 µg) | 2 µL |
在RNase-free离心管中用移液器轻轻吹打混匀。 42℃ 2 min。
2. 配制反转录反应体系
在第1步的反应管中直接加入4 × RT Mix
| 4 × RT Mix | 5 µL |
| 第1步的反应液 | 15 µL |
用移液器轻轻吹打混匀。
3. 进行反转录反应
| 37℃* | 15 min |
| 85℃ | 5 sec |
*如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可将反应温度提高至50℃，有助于提高产量。
反转录产物可用于qPCR反应。可在-20℃保存；长期存放建议分装后在-70℃保存；cDNA应避免反复冻融。
具体的操作步骡如下:
步骤一：取3 µL 5x gDNAremover，加入10 µL RNase free H2O和2 µL RNA，用移液器轻轻吹打，充分混匀，瞬时离心，经42 ℃，2min 处理，以去除基因组 DNA；
步骤二：取5 µL 4x RT Mix，加入步骤一得到的反应液15 µL中，用移液器轻轻吹打，充分混匀，瞬时离心，经37 ℃，l5 min：85 ℃，5sec 处理，即可得到反转录的cDNA产物，反转录产物用qPCR反应。
注意事项
1. 第一链cDNA产物可直接用作qPCR反应的模板。建议作为模板的cDNA产物的体积不超过qPCR反应体积的1/10。
2. 反转录反应体系建议加入不超过1 µg的Total RNA。如果目的基因表达量非常低，最多加入5 µg Total RNA ，否则加入RNA量过高， 可能会超出后续定量PCR的线性范围。
3. cDNA产物仅适用于qPCR反应，不适用于克隆等下游实验的长片段PCR扩增。
4.RNA 相关操作等请使用全新 RNase-free 枪头、RNase-free 离心管等实验耗材。建议 RNA 实验使用的器具、试剂和无菌水等专用，避免 RNase 污染。
5.RT Mix 使用前需室温化冻，化冻后可能会有析出，混匀后可正常使用。建议分装避免反复冻融。