凝血酶/Thrombin

产品信息

产品参数

CAS：9002-04-4

性状：冻干粉

溶解性：溶于 0.9% NaCl 溶液

酶活：＞800 units/mg solid（具体以标签为准）

保存条件

蓝冰运输，-20℃可稳定保存 3 年。

酶活检测

以纤维蛋白原为底物，按 2010 版药典凝血酶冻干粉检测。

溶解方法

可用生理盐水（0.9% NaCl 溶液）配制，储存液参考浓度为 1000 U/mL，-20℃可稳定保存 6 个月。为避免反复冻融，可分装冻存。

使用方法

 一、凝血实验 

凝血酶（Thrombin）来源于牛血浆，分子量 37 KD，是由两条肽链（31 KD 和 6 KD）通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原（凝血因子Ⅱ）激活后形成的蛋白质水解酶，其催化纤维蛋白原（fibrinogen）水解掉 A肽和 B 肽，由此形成纤维蛋白单体，单体进一步聚合，在血小板、红细胞和白细胞等参与下形成血凝块。

二、标签切割

由于凝血酶具有切割序列专一性强，水解效率高的特点，它也被广泛地应用于基因工程产品的开发，其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂，尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶，凝血酶最佳切割位点是 X4-X3-PR[K]-X1'-X2'，这里 X4 和 X3 是疏水氨基酸而 X1'和 X2'是非酸性氨基酸，一些经常使用的识别位点是 L-V-P-R-G-S，L-V-P-R-G-F 和 M-Y-P-R-G-N。在 X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在 X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他识别位点是 X2-R[K]-X1', 这里 X2 或者 X1'是甘氨酸，例如 A-R-G 和 G-K-A，这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和 N 末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切，通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割，而且也可以避免可能发生的错误切割。

作为切割标签的蛋白酶具有以下特点：

1. 纯度高：SDS-PAGE 检测图谱无杂蛋白条带。

2. 不含有其他蛋白酶活性。

3. 酶切活性高，能够有效切质量比为 1:1000 的蛋白。切割可在 20℃到 37℃之间切割 0.3 到 16 小时。

4. 有效的酶切缓冲液是 20 mM Tris-HCl 缓冲液，含 150 mM 氯化钠，pH 8.0。

5. 凝血酶可从切割产物中用 p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。

酶切条件：

凝血酶酶切条件举例：20 mM Tris-HCl 缓冲液，含 150 mM NaCl，pH 8.0 体系中：

融合蛋白总量 100 µg

凝血酶用量 0.2-0.3 U

温度 20℃-37℃

酶切时间 0.3 h-16 h

根据底物蛋白酶切位点的差异，可以适当调整凝血酶的工作浓度与酶切时间，以便达到较好的酶切效果。

注意事项

1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作 。

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凝血酶/Thrombin