SmArt First Strand cDNA Synthesis Kit(4x)(+gDNA Remover)
产品描述
本产品是一种高效、稳定cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒中4 x gDNA Removal Mix能够特异性去除双链DNA,而不消化RNA样品、逆转录引物及合成的cDNA,并且具有热敏感性，可在55°C快速不可逆失活，实现去除基因组污染与逆转录反应的同步进行。4 x Supreme Enzyme Mix包含反转录所需要的所有组分，只需要添加RNA模板和RNase-free ddH2O即可进行反转录反应，与普通逆转录酶系统相比，具有逆转录能力强(合成较多全长cDNA)、无RNaseH活性、热稳定性高和半衰期长等优点。该逆转录酶产物具有得率更高，获得的cDNA片段更长,模板使用范围更广等特点。
产品组份
| 货号 | 组分 | 100 T |
| DY80304 | 4 x gDNA Removal Mix | 300 µL |
4 x Supreme Enzyme Mix | 500 µL | |
DEPC -Treated ddH2O | 1 mL |
保存条件
-20℃保存，有效期1年。
适用范围
本产品广泛适用于cDNA合成及文库构建；PCR扩增；RT-qPCR检测。
产品特点
1、逆转录能力强、cDNA合成得率高，片段更长。
2、高热稳定性，反应温度42-55°C，有助于RNA二级结构打开。
3、合成片段≤15kb。
4、无RNaseH活性，避免第一链cDNA合成过程中DNA/RNA杂交体中模板RNA被降解，从而保证第一链cDNA合成量和长度。
注意事项
1、防止RNase污染：请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase-free。
2、在冰上操作，防止发生RNA降解。
3、试剂解冻后需要进行混匀后离心后置于冰上操作。
4、试剂使用前需要短暂离心。
5、转录酶对PCR有抑制作用，用于PCR反应的cDNA产物体积建议不超过PCR反应体积的1/10，建议将cDNA稀释5-10倍后用于定量检测。
需准备的材料
材料
● RNase-free 1.5 mL离心管、0.2 mL PCR管、移液器吸头。
● 移液器、PCR仪、冰或移动冰盒。
RNA
● 高质量的RNA对于获得高质量的cDNA至关重要。实验前请用电泳验证RNA的完整性。
实验流程
1. 基因组DNA去除
4 x gDNA Removal Mix | 5 µL |
Totol RNA or mRNA | 10 pg-1 µg |
| 10 pg-500 ng | |
| 4 x Supreme Enzyme Mix | 5 µL |
DEPC -Treated ddH2O | 补足到20 µL |
在RNase-free离心管中用移液器轻轻吹打混匀。
2. 进行反转录反应
温度 | 时间 |
37℃ | 5 min |
55℃ | 15 min* |
85℃ | 30 s |
*可以根据后续实验目的灵活调节逆转录时间，qPCR 5～15 min，PCR 15～30 min。
产物可立即用于PCR或qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA避免反复冻融。
售前咨询专员