2 ×qPCR Universal Mix (SYBR Green)
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
| 2×qPCR Universal Mix（SYBR Green) | DY20308 | 5*1mL |
产品描述
本产品是利用新型超灵敏SYBR染料作为染色剂，其吸收波长及激发波长与SYBR Green I一致，专用于染料法(SYBR Green I)定量PCR实验。本产品包含了快速热启动SP Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、新型 SYBR荧光染料和Mg2+，主要用于基因组DNA靶序列或cDNA靶序列检测。本产品所含新型SYBR染料可以特异性地与双链DNA结合，其稳定性极高，冻融后不会对PCR反应进行抑制(SYBR Green I冻融后会产生PCR抑制剂）。本产品在反复冻融 10次后依旧能获得—致的Ct值。本产品含有特殊修饰的快速热启动SP Taq DNA Polymerase,在升温过程中自动释放决速热启动SP Taq DNA Polymerase活性，无需格外设置高温激活时间。整个PCR反应过程比普通热启动PCR反应节省约50min,大大缩短了获得定量结果的时间。配合高效的PCR缓冲体系、新型SYBR染料和快速热启动SP Taq DNA Polymerase,在保证高效扩增效率的同时有效地抑制了非特异性产物及引物二聚体的产生，显著地提高PCR效率，增加结果的稳定性。
保存方式
-20 ℃ 避光储存 ，有效期 12 个月。
避免反复冻融。可在 4℃避光条件下稳定存放 6 个月。
注意事项
1. 使用前请混匀，如果产生泡沫请轻弹去泡并短暂离心后使用。
2. 本产品中含有新型SYBR染料，强光会引起荧光淬灭现象，请在保存本产品或配制PCR反应液的时候尽量避免强光照射。
3. 本产品不能用于探针法荧光定量PCR。
建议反应体系（推荐冰上配制）
| 组分 | 体积( μL ） | 体积( μL ） | 体积( μL ） |
| 2×qPCR Universal Mix(SYBR Green) | 25 | 10 | 5 |
| 模板 DNA | 1 | 1 | 1 |
| Forward Primer ( 10 μM) | 1 | 0.5 | 0.25 |
| Reverse Primer ( 10 μM) | 1 | 0.5 | 0.25 |
| 无菌超纯水 | to 50 | to 20 | to 10 |
qPCR 反应程序（可根据机型适当调整）
a. 根据引物的Tm值进行退火（退火/延伸）温度的设定。若扩增片段在200bp以内 ，延伸（退火/延伸）时间可以设置为15sec。此外 ，延伸时间的设置还 需根据qPCR仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整。
b. 不同仪器的熔解曲线采集程序有所差别 ，一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时 ，则需要进行反应条件的优化 ，可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行 ：
1. 引物浓度调整 ：当引物终浓度在 0. 1~ 1.0μM 范围之间变化时 ，引物浓度越低, 扩增特异性越高 ，但扩增效率会有所下降。
2. 扩增程序优化 ：需提高扩增特异性 ，可使用两步法程序或提高退火温度。需提高扩增效率 ，可使用三步法程序或延长延伸时间。
引物设计指南
1. 扩增产物长度建议控制在 80~200 bp ，引物长度为 18~25 bp。
2. 正向引物和反向引物的 Tm值相差不超过 1℃为佳 ，Tm 值控制在 58~62℃为佳。
3. 引物的 GC 含量控制在 40%~60%之间。引物 3'端最后一个碱基最好为 G 或者 C。
4. 引物 A、G、C、T 整体分布尽量要均匀 ，避开 T/C 或者 A/G 的连续结构（特别是 3'端）。
5. 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列。
6. 使用 NCBI BLAST 功能检索确认引物的特异性。
售前咨询专员