BCA 蛋白定量试剂盒
BCA Protein Quantitation Assay Kit
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| DY30204 | BCA 蛋白定量试剂盒 | 500 T | 320 |
产品描述
BCA 蛋白定量试剂盒（BCA Protein Quantitation Assay Kit）是根据最常用的 BCA 蛋白浓度检测法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单化、稳定性高、灵敏度高、兼容性好。最小检测浓度达到25 µg/mL，最小检测蛋白量达到0.5 µg，样品体积为1-20 µL。在50-2000 µg/mL浓度范围内有较好的线性关系。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5% 的SDS，5% 的 TritonX-100，5% 的Tween20、Tween60、Tween80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保 EDTA 低于10 mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1 mM，β-巯基乙醇低于0.01%。
产品组成
货号 | 名称 | 规格 |
DY30204-A | BCA蛋白定量A液 | 100 mL |
DY30204-B | BCA蛋白定量B液 | 4 mL |
DY30204-C | 5 mg/mL BSA | 1 mL |
保存方式
BSA蛋白标准液-20℃保存，其它组分4℃保存，有效期12个月。
操作说明
1. 比色皿检测方法
1） 取适量 5 mg/mL BSA标准品稀释至0.5 mg/mL。可用蒸馏水或PBS稀释。
2） 根据样品数量，配置BCA工作液，50体积的溶液A匹配1体积的溶液B。室温稳定24 h 。
3） 用与待测样本相一致的稀释液按照下表配置BSA标准品。
BSA标准品体系配制
Vial | 稀释液体积（μL） | 0.5 mg/mL BSA体积（μL） | BSA终浓度（μg/mL） |
1 | 0 | 200 | 500 |
2 | 40 | 160 | 400 |
3 | 80 | 120 | 300 |
4 | 120 | 80 | 200 |
5 | 160 | 40 | 100 |
6 | 200 | 0 | 0 |
4） 取干净的试管，分别加入200 μL待测蛋白样品，并做好标记，推荐每个样品做2-3个平行反应。
5） 在每个标准品及待测样品管中分别加入2 mL BCA工作液，37℃放置20-30 min。 也可室温孵育2h，或者60℃孵育30 min。BCA检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
6） 冷却到室温，在562 nm处测其吸光度值，可检测范围为540-595 nm。
7） 制作标准曲线，计算样品中的浓度。 计算样品中蛋白浓度，如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请稀释样品或重新提取。
2. 微孔板检测方法
1） 标准样品的配置和BCA工作液的配置如上。
2） 用与待测样本相一致的稀释液按照下表配置BSA标准品。
BSA标准品体系配制
Vial | 稀释液体积（μL） | 0.5mg/mL BSA体积（μL） | BSA终浓度（μg/mL） |
1 | 0 | 20 | 500 |
2 | 4 | 16 | 400 |
3 | 8 | 12 | 300 |
4 | 12 | 8 | 200 |
5 | 16 | 4 | 100 |
6 | 20 | 0 | 0 |
3）在微孔板的空中加入20 μL待测样品，每个样本2-3个平行重复。
4）每孔加入200 μL BCA工作液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30 min。
5）冷却到室温，在562 nm处测其吸光度值，可检测范围为540-595 nm。
6）绘制标准曲线，并计算 样品中的蛋白浓度，如果所得蛋白浓度不在检测范围，请稀释样品或重新提取。
注意事项
1. 在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或30℃温育溶解，若发现细菌污染则应丢弃。
2. 样品中若含有EDTA, EGTA,DTT, 硫酸铵及脂类会影响结果，请用Bardford方法。高浓度的去垢剂也会影响实验结果，可用TCA沉淀去除干扰物质。